PCR是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量,以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析。PCR醫(yī)學(xué)檢測(cè)方法在臨床上快速診斷細(xì)菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。
PCR原理用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA片段,類似于天然DNA的復(fù)制過(guò)程。以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板,以一對(duì)分別與模板5’末端和3’末端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成,重復(fù)這一過(guò)程,即可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。
PCR醫(yī)學(xué)檢測(cè)先根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)樣本要求,進(jìn)行標(biāo)本采集,常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。獲得患者樣本后需盡快進(jìn)行檢測(cè),如無(wú)法立即檢測(cè)需要轉(zhuǎn)運(yùn)的樣本,應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行低溫封存,并送到專門(mén)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)機(jī)構(gòu)收到樣本后會(huì)對(duì)樣本進(jìn)行核酸提取。核酸提取試劑應(yīng)使用批準(zhǔn)的、產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的核酸提取試劑盒,病毒RNA先需要轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄為cDNA,再進(jìn)行擴(kuò)張檢測(cè)。PCR檢測(cè)應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的熒光定量PCR儀,通過(guò)熒光定量PCR所得到的樣本CT值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有的病毒。