細胞膜熒光探針是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△4 m的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，細胞膜熒光探針聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，細胞膜熒光探針不能聚集在線粒體的基質中，此時細胞膜熒光探針為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過細胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用細胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。單體的Zui大激發(fā)波長為 515nm，Zui大發(fā)射波長為529nm；聚合物的Zui大激發(fā)波長為585nm，Zui大發(fā)射波長為590nm 。實際觀察時，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。
染色步驟：
1、于6-，12或24-孔板上進行細胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進行凋亡誘導。 注：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2、取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內(nèi)。
3、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4、用0.5 mL
細胞膜熒光探針工作液重懸細胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
5、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
6、用2 mL細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
7、重復步驟6。
8、用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，即可進行后續(xù)的流式分析。
注意事項：
1、如果一次使用量較小，需把每管再適當進行分裝，盡量避免反復凍融。
2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
